Plásmido Doble Nickase (m) Rent2: sc-435860-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Rent2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rent2 (m) y el plásmido de doble nickasa Rent2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Upf2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rent2 Anticuerpo (G-10): sc-374230
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Rent2 | sc-435860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Rent2 | sc-435860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Upf2 (Rent2) codifica un factor esencial de vigilancia del ARN necesario para la degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (NMD), una vía que detecta y degrada transcritos que contienen codones de terminación prematuros para mantener la fidelidad del proteoma. RENT2 actúa junto con componentes centrales de la NMD como UPF1 y UPF3 y acopla la terminación de la traducción con la remodelación de los mRNP, influyendo en la estabilidad del ARNm, los resultados del splicing alternativo y la regulación del transcriptoma en respuesta al estrés. La actividad de Upf2 afecta el desarrollo neuronal, la homeostasis inmunitaria y la integridad de la línea germinal, y la NMD desregulada se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo, el amortiguamiento de transcritos relevantes para el cáncer y respuestas alteradas al estrés genotóxico o proteotóxico. La perturbación experimental de Upf2 se utiliza ampliamente para estudiar el control de calidad del ARN, la vigilancia de la traducción y la robustez de la expresión génica en células de mamífero.
Rent2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Upf2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Upf2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Upf2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Upf2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.