Plasmide Double Nickase (m) Rent1: sc-422649-NIC

La protéine murine Upf1 (Rent1) code une hélicase ARN dépendante de l’ATP, essentielle à la dégradation des ARNm médiée par les codons non-sens (NMD), une voie de surveillance de l’ARN conservée qui reconnaît les codons stop prématurés et favorise la dégradation des transcrits aberrants. UPF1 agit de concert avec les facteurs de terminaison de la traduction et les protéines SMG pour déclencher le remodelage des complexes mRNP, la dégradation de l’ARN et la régulation du contrôle qualité du transcriptome. Au-delà de la NMD canonique, UPF1 contribue au renouvellement des ARNm, aux réponses au stress réplicatif et à la stabilité du génome via des interactions avec les réseaux de maturation de l’ARN et de réponse aux dommages de l’ADN. Une activité UPF1 déréglée a été associée à des altérations de la protéostasie et de la signalisation de stress dans des modèles de dysfonctionnement neurodéveloppemental, de biologie du cancer et de régulation inflammatoire, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques centrées sur les voies.

Rent1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Upf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Upf1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Upf1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Upf1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.