Plásmido CRISPR de Activación (m) RelB: sc-422643-ACT

Relb codifica RelB, un miembro de la familia NF-κB/Rel que actúa como un factor de transcripción central en la vía no canónica de NF-κB. RelB suele formar heterodímeros con p52 para regular programas génicos que controlan la diferenciación de células inmunitarias, la presentación de antígenos, la organogénesis linfoide y la señalización inflamatoria aguas abajo de receptores como BAFFR, CD40 y el receptor de linfotoxina-β. En sistemas murinos, la actividad de RelB influye en la maduración de las células dendríticas y en la comunicación cruzada entre el estroma y el sistema inmune, dando forma a redes de citocinas y quimiocinas que coordinan la homeostasis tisular. La transcripción dependiente de RelB desregulada se ha implicado en activación inmune aberrante y estados inflamatorios crónicos, lo que convierte a Relb en un nodo útil para interrogar vías y redes transcripcionales.

RelB El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Relb sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RelB El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Relb en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Relb, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RelB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Relb y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RelB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RelB en células tumorales con expresión de Relb silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.