Reg IV Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404117-ACT

Il gene umano **REG4** codifica la proteina rigenerante derivata dalle isole pancreatiche 4 (Reg IV), un membro secreto della famiglia delle lectine di tipo C, implicato nella differenziazione delle cellule epiteliali, nella difesa mucosale e nel rimodellamento tissutale del tratto gastrointestinale. L’espressione di Reg IV è associata alla modulazione di programmi di proliferazione e sopravvivenza, con collegamenti riportati agli output di segnalazione associati a EGFR/ERK e PI3K/AKT in contesti epiteliali. La proteina è spesso studiata come fattore di tipo biomarcatore nella biologia dell’apparato digerente ed è associata a processi patologici che accompagnano stress epiteliale, infiammazione e rimodellamento associato ai tumori. Queste caratteristiche rendono **REG4** un bersaglio utile per indagare la regolazione trascrizionale, le reti di segnalazione di fattori secreti e fenotipi epiteliali rilevanti per la malattia.

Reg IV Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di REG4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Reg IV Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus REG4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione REG4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Reg IV. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus REG4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Reg IV nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Reg IV nelle cellule tumorali con espressione di REG4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.