Plásmido CRISPR de Activación (m) Reg IIIγ: sc-422640-ACT

Reg3g codifica la proteína 3 gamma derivada de islotes en regeneración (Reg IIIγ), una lectina tipo C secretada, enriquecida en los compartimentos del epitelio intestinal y de las células de Paneth, que contribuye a la defensa de la barrera mucosa al unirse al peptidoglicano bacteriano y modular las interacciones entre el huésped y la microbiota. Su expresión se induce intensamente por vías de detección de citocinas y microbios, incluidas la señalización de IL-22/STAT3 y las respuestas inmunitarias innatas dependientes de receptores tipo Toll, lo que vincula a Reg IIIγ con la restitución epitelial y los programas antimicrobianos. La actividad alterada de la familia REG3 se ha asociado con estados inflamatorios en superficies de barrera, por lo que Reg3g es un marcador útil y un nodo mecanístico para estudiar la inflamación intestinal, la disbiosis y las respuestas de estrés epitelial en modelos murinos.

Reg IIIγ El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Reg3g sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Reg IIIγ El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Reg3g en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Reg3g, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Reg IIIγ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Reg3g y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Reg IIIγ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Reg IIIγ en células tumorales con expresión de Reg3g silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.