Plasmide CRISPR/Cas9 KO Reg IIIα (h): sc-404278

Présentation

REG3A code la lectine sécrétée Reg IIIα, une protéine antimicrobienne de la famille des lectines de type C, exprimée principalement par les cellules épithéliales du tractus gastro-intestinal et d’autres surfaces muqueuses. Reg IIIα se lie aux glucides de la paroi cellulaire microbienne, soutient la défense innée de la barrière et contribue à l’homéostasie hôte–microbiote lors de l’inflammation. Son expression est régulée par des programmes épithéliaux induits par les cytokines, notamment la signalisation IL-22/STAT3 et des réponses associées à NF-κB, et elle est fréquemment utilisée comme marqueur des lésions et de la réparation des muqueuses. Des niveaux anormaux de REG3A ont été rapportés dans des affections inflammatoires et métaboliques touchant les tissus barrières, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réponses épithéliales au stress et de l’inflammation déclenchée par les microbes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Reg IIIα (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène REG3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du REG3A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert REG3A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Reg IIIα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en REG3A pour l'étude de la signalisation de Reg IIIα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de REG3A essentiels à la fonction de Reg IIIα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de REG3A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Reg IIIα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Reg IIIα plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus REG3A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Reg IIIα plasmide HDR (h) et le Reg IIIα (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie REG3A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles REG3A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.