REEP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432536

Übersicht

Reep2 kodiert das rezeptorexpressionsfördernde Protein 2 (REEP2), ein Mitglied der REEP-Familie, die an der Formgebung von Membranen des endoplasmatischen Retikulums (ER) beteiligt ist und ER–Mikrotubulus-Interaktionen unterstützt, welche den intrazellulären Transport beeinflussen. REEP2 trägt zur Verarbeitung von Membranproteinen und zur neuritenassoziierten ER-Organisation bei – Prozesse, die für die Aufrechterhaltung der neuronalen Morphologie und der Proteostase wichtig sind. Störungen der Funktionen der REEP-Familie wurden mit axonaler Vulnerabilität und neurodegenerativen Mechanismen in Verbindung gebracht, wodurch Reep2 ein relevanter Ansatzpunkt für die Untersuchung von Signalwegen ist, die die Axonerhaltung und Stressantworten beeinflussen. In Mausmodellen kann eine Perturbation von Reep2 genutzt werden, um ER-Remodelling, Organellendynamik und transportabhängige Signalwege in Neuronen und anderen sekretorischen Zelltypen zu untersuchen.

Das REEP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Reep2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Reep2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Reep2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die REEP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Reep2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der REEP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Reep2-Exone abzielen, die für die REEP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Reep2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom REEP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom REEP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Reep2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das REEP2 HDR-Plasmid (m) und REEP2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Reep2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Reep2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.