Plásmido Doble Nickase (r) REDD-1: sc-437314-NIC
- Especies Diana: rat
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (r)REDD-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa REDD-1 (r) y el plásmido de doble nickasa REDD-1 (r2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a . Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (r) REDD-1 | sc-437314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (r2) REDD-1 | sc-437314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
REDD-1 (también conocido como DDIT4) es un regulador inducible por estrés que conecta la hipoxia, el daño del ADN, el estrés oxidativo y la limitación de nutrientes con la supresión de la señalización de mTORC1 a través del eje TSC1/2–Rheb. En células de rata, REDD-1 ayuda a coordinar la adaptación metabólica al limitar la síntesis de proteínas y el crecimiento celular, a la vez que influye en la autofagia, la función mitocondrial y la homeostasis redox. La expresión alterada de REDD-1 se ha asociado con una actividad de mTOR desregulada y con fenotipos de tolerancia al estrés relevantes para la disfunción metabólica, modelos de lesión relacionada con isquemia y la remodelación tisular asociada a la inflamación. Dado que REDD-1 se sitúa en un punto de convergencia de las vías de HIF-1, AMPK y mTOR, se utiliza con frecuencia para investigar los circuitos de respuesta al estrés y los programas transcripcionales y de proteostasis aguas abajo.
REDD-1 El plásmido de doble nicasa (r) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus en líneas celulares rat. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de . Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de . Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.