Plasmide CRISPR d'Activation (h) REDD-1: sc-401797-ACT

Le gène humain **DDIT4** code **REDD-1**, un régulateur inductible par le stress qui intègre les signaux d’hypoxie, de dommages à l’ADN, de stress du réticulum endoplasmique (RE) et de privation de nutriments afin de freiner l’activité de **mTORC1** via une modulation en amont de l’axe **TSC1/2–Rheb**. En atténuant les programmes de croissance anaboliques, REDD-1 influence la synthèse protéique, l’autophagie, le métabolisme mitochondrial et l’homéostasie redox, façonnant l’adaptation cellulaire à des microenvironnements fluctuants. Des altérations de l’expression de **DDIT4/REDD-1** ont été rapportées dans divers contextes caractérisés par un stress métabolique et une signalisation mTOR dérégulée, notamment en cancérologie, dans les maladies neurodégénératives et les états inflammatoires, où elles peuvent affecter la survie et la tolérance au stress. En tant que nœud à réponse transcriptionnelle, REDD-1 est fréquemment utilisé pour étudier le couplage des voies entre la signalisation **HIF-1**, la détection énergétique dépendante de **l’AMPK** et les sorties de croissance contrôlées par mTOR.

REDD-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DDIT4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

REDD-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DDIT4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DDIT4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de REDD-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DDIT4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de REDD-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie REDD-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DDIT4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.