Plásmido CRISPR de Activación (h) Recoverin: sc-404106-ACT

El gen humano **RCVRN** codifica **recoverina**, una proteína de unión a Ca2+ con motivo **EF-hand**, enriquecida en la retina, que funciona como un interruptor **Ca2+-miristoilo** para modular la fototransducción. Ante cambios en el Ca2+ intracelular durante la adaptación a la luz, la recoverina regula la actividad de la **quinasa de rodopsina (GRK1)**, modulando la dinámica de fosforilación de la rodopsina y la cinética de recuperación en fotorreceptores de bastones y conos. A través de su papel en la señalización de **GPCR**, la homeostasis de Ca2+ y la señalización visual dependiente de **cGMP**, la recoverina contribuye a la transducción normal de señales retinianas y a la adaptación. La alteración de la expresión o la inmunorreactividad de la recoverina se ha asociado con contextos de disfunción retiniana, lo que convierte a **RCVRN** en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de la biología de los fotorreceptores y de las redes de señalización visual.

Recoverin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RCVRN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Recoverin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RCVRN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RCVRN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Recoverin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RCVRN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Recoverin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Recoverin en células tumorales con expresión de RCVRN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.