Plásmido CRISPR de Activación (h) RCC1: sc-402078-ACT

RCC1 (regulador de la condensación cromosómica 1) codifica un factor de intercambio de nucleótidos de guanina asociado a la cromatina que genera Ran-GTP en los cromosomas, estableciendo el gradiente de Ran necesario para el ensamblaje del huso mitótico y la reformación de la envoltura nuclear. Al controlar el transporte nucleocitoplasmático dependiente de Ran, RCC1 coordina la progresión del ciclo celular, la condensación cromosómica y la organización nuclear posmitótica. La función de RCC1 se entrecruza con los programas de replicación del ADN y estabilidad del genoma mediante su acoplamiento a la dinámica de la cromatina y al control mitótico. La actividad o expresión desregulada de RCC1 se ha asociado con fenotipos proliferativos y respuestas de checkpoint alteradas, lo que la hace relevante para estudiar mecanismos que sustentan el crecimiento oncogénico y la aneuploidía.

RCC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RCC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RCC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RCC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RCC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RCC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RCC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RCC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RCC1 en células tumorales con expresión de RCC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.