Plásmido CRISPR de Activación (h) RBPMS: sc-403369-ACT

RBPMS (proteína de unión a ARN con empalme múltiple) es una proteína citoplasmática de unión a ARN que reconoce elementos ricos en U para regular la expresión génica posranscripcional, incluida la estabilidad del ARN, su localización y el empalme alternativo. Se utiliza ampliamente como marcador de la identidad de las células del músculo liso vascular y de las células ganglionares de la retina, y participa en programas que controlan la organización del citoesqueleto, la motilidad y la diferenciación. Mediante la modulación del destino del ARN, RBPMS influye en redes transcripcionales y de señalización que determinan transiciones de estado celular y respuestas al estrés. Se ha informado de una expresión alterada de RBPMS en diversos contextos relevantes para la remodelación vascular, la fibrosis y los fenotipos de células tumorales, lo que respalda su estudio en la plasticidad celular asociada a la enfermedad.

RBPMS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RBPMS sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RBPMS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RBPMS en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RBPMS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RBPMS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RBPMS y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RBPMS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RBPMS en células tumorales con expresión de RBPMS silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.