Partículas Lentivirales de Activación (h) RBM15: sc-417289-LAC

RBM15 (proteína 15 con motivo de unión a ARN) es un factor nuclear de unión a ARN que regula la expresión génica posranscripcional mediante el control del empalme (splicing) del pre-ARNm, la estabilidad de los transcritos y la exportación de ARN. Se ha relacionado con la regulación epitranscriptómica a través de su asociación con complejos escritores de m6A e influye en los programas de diferenciación hematopoyética al modular el procesamiento de ARN específico de linaje. RBM15 contribuye a redes de transcripción y maduración del ARN que determinan decisiones de destino celular, con relevancia recurrente en la hematopoyesis desregulada. La alteración de la función de RBM15 y las fusiones asociadas a RBM15 se han estudiado en el contexto de la señalización leucemogénica y de defectos más amplios en el metabolismo del ARN.

Las partículas de activación lentiviral RBM15 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RBM15 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RBM15 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RBM15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RBM15. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RBM15 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.