Plásmido CRISPR de Activación (h) RASL11A: sc-409106-ACT

RASL11A codifica una pequeña GTPasa tipo Ras implicada en la regulación de redes de transducción de señales que acoplan la unión e hidrólisis de GTP con el control posterior del crecimiento celular, la diferenciación y la organización del citoesqueleto. Como parte de la superfamilia Ras, RASL11A está en posición de influir en vías relacionadas con MAPK y en otras rutas dependientes de GTPasas que coordinan el tráfico de membranas y la homeostasis celular. La regulación alterada de la señalización de la familia Ras se asocia ampliamente con la transformación oncogénica y fenotipos de respuesta al estrés, lo que hace que la expresión y actividad de RASL11A sean relevantes para estudiar el ajuste fino de estas vías en biología del cáncer. Sus dinámicas de expresión endógena también respaldan investigaciones sobre programas de señalización específicos de tejido y respuestas dependientes del contexto ante perturbaciones.

RASL11A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RASL11A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RASL11A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RASL11A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RASL11A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RASL11A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RASL11A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RASL11A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RASL11A en células tumorales con expresión de RASL11A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.