Plasmide Double Nickase (h) RASAL3: sc-404999-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RASAL3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RASAL3 Double Nickase (h) et le plasmide RASAL3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RASAL3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RASAL3 | sc-404999-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RASAL3 | sc-404999-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RASAL3 code une protéine activatrice de l’activité GTPase de Ras (RasGAP) qui atténue la signalisation Ras en accélérant l’hydrolyse du GTP sur les petites GTPases de la famille Ras, limitant ainsi l’activité en aval des voies MAPK/ERK et PI3K–AKT. Dans les cellules de la lignée immunitaire, RASAL3 participe au réglage fin de la signalisation proximale des récepteurs de l’antigène, influençant les seuils d’activation, la prolifération et les programmes de différenciation. En modulant des réponses transcriptionnelles et métaboliques dépendantes de Ras, RASAL3 peut affecter les réponses au stress cellulaire et les décisions de survie. La dérégulation du contrôle de la voie Ras est largement pertinente dans les contextes de dysfonction immunitaire et de signalisation oncogénique, ce qui fait de RASAL3 un nœud utile pour des études mécanistiques de la transduction du signal.
RASAL3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RASAL3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RASAL3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RASAL3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RASAL3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.