Ras-GRF2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404141

Descripción general

RASGRF2 codifica Ras-GRF2, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina regulado por calcio y fosfolípidos que activa Ras y otras pequeñas GTPasas relacionadas para controlar la dinámica de la señalización MAPK/ERK. Ras-GRF2 integra señales derivadas de la actividad neuronal y de la señalización mediada por receptores para influir en la plasticidad sináptica, el crecimiento de neuritas y la remodelación del citoesqueleto a través de quinasas aguas abajo y vías de la familia Rho. Al modular programas transcripcionales dependientes de Ras, RASGRF2 afecta los estados de proliferación y diferenciación celular de manera dependiente del contexto. El acoplamiento desregulado de la vía de Ras en el que participa Ras-GRF2 se ha investigado en neurobiología y en modelos de señalización relacionados con el cáncer, donde la activación alterada de GTPasas puede reconfigurar las respuestas de crecimiento y supervivencia.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ras-GRF2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RASGRF2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RASGRF2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RASGRF2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ras-GRF2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RASGRF2 para la investigación de la señalización de Ras-GRF2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RASGRF2 críticos para la función de Ras-GRF2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RASGRF2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Ras-GRF2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RASGRF2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ras-GRF2 (h) y el plásmido HDR Ras-GRF2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RASGRF2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RASGRF2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.