Plásmido Doble Nickase (h) RARα/Retinoic Acid Receptor α: sc-400529-NIC

RARA codifica RARα, un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para unirse a elementos de respuesta al ácido retinoico y regular programas transcripcionales que controlan decisiones sobre el destino celular. A través de la señalización por retinoides, RARα coordina procesos como el desarrollo embrionario, la diferenciación epitelial, el control del ciclo celular y la remodelación de la cromatina de manera dependiente del contexto. La actividad de RARα está determinada por la disponibilidad del ligando y el intercambio de correaguladores, lo que la vincula a vías que gobiernan la represión/activación transcripcional y el compromiso de linaje. La desregulación de la transcripción dependiente de RARA y de la señalización del receptor se ha asociado con estados de diferenciación alterados y programas transcripcionales oncogénicos en contextos hematopoyéticos y de tejidos sólidos, lo que respalda su relevancia en estudios de mecanismos de enfermedad.

RARα/Retinoic Acid Receptor α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RARA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RARA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RARA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RARA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.