Plásmido CRISPR de Activación (h) RARα/Retinoic Acid Receptor α: sc-400529-ACT

RARA codifica RARα, un receptor nuclear activado por ligando que heterodimeriza con los RXR para unirse a elementos de respuesta al ácido retinoico y regular programas transcripcionales que controlan decisiones del destino celular. A través de la señalización por retinoides, RARα modula el estado de la cromatina y redes génicas que rigen la diferenciación, la proliferación y la apoptosis, con fuertes vínculos con la maduración hematopoyética y el desarrollo epitelial. Su actividad se integra con vías transcripcionales y epigenéticas centrales, incluido el intercambio de correpresores/coactivadores y el “cross-talk” con las señales MAPK y PI3K. La expresión o señalización desregulada de RARA se asocia con estados de diferenciación alterados y se estudia ampliamente en biología del cáncer y en modelos de enfermedades del desarrollo.

RARα/Retinoic Acid Receptor α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RARA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RARα/Retinoic Acid Receptor α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RARA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RARA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RARα/Retinoic Acid Receptor α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RARA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RARα/Retinoic Acid Receptor α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RARα/Retinoic Acid Receptor α en células tumorales con expresión de RARA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.