Plásmido CRISPR de Activación (h) Raptor: sc-400960-ACT

El gen humano **RPTOR** codifica **Raptor**, un componente de andamiaje esencial del complejo **mTOR 1 (mTORC1)** que recluta sustratos como **S6K** y **4E-BP1** para coordinar las señales de nutrientes, energía y factores de crecimiento con la síntesis de proteínas, la supresión de la autofagia y la reprogramación metabólica. Mediante la regulación de la especificidad por sustratos y la localización de mTORC1, Raptor influye en el crecimiento celular, la progresión del ciclo celular, la biogénesis de ribosomas y la señalización asociada a los lisosomas. La actividad desregulada de RPTOR/mTORC1 se ha asociado con alteraciones de la señalización anabólica observadas en la biología del cáncer, las enfermedades metabólicas y en contextos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para el análisis de vías de señalización. Modular la expresión de RPTOR ofrece un enfoque directo para estudiar la retroalimentación entre la señalización PI3K–AKT, AMPK y las vías de detección de nutrientes que determinan la homeostasis celular.

Raptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RPTOR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Raptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RPTOR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RPTOR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Raptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RPTOR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Raptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Raptor en células tumorales con expresión de RPTOR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.