Plasmide CRISPR/Cas9 KO rapsyn (m): sc-422599
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- rapsyn Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique rapsyn, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: rapsyn Antibody (1234): sc-58585
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO rapsyn (m) | sc-422599 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Rapsn code la rapsyne, une protéine d’échafaudage postsynaptique qui ancre et regroupe les récepteurs nicotiniques de l’acétylcholine au niveau de la jonction neuromusculaire, en coordonnant la maturation et le maintien de la synapse. Grâce à ses interactions avec les sous-unités de l’AChR et des composants du cytosquelette, la rapsyne favorise la stabilisation des récepteurs, l’organisation de la plaque motrice et une transmission neuromusculaire efficace. La perturbation du regroupement dépendant de Rapsn altère l’architecture synaptique et la signalisation au niveau de la plaque motrice, reliant ainsi cette voie à un dysfonctionnement de la jonction neuromusculaire. Le gène Rapsn de la souris est donc largement utilisé pour modéliser les mécanismes qui régissent la synaptogenèse, le trafic des récepteurs et la stabilité synaptique dans le muscle squelettique.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO rapsyn (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rapsn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rapsn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rapsn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine rapsyn.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rapsn pour l'étude de la signalisation de rapsyn, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Rapsn essentiels à la fonction de rapsyn
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rapsn pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le rapsyn plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le rapsyn plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rapsn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le rapsyn plasmide HDR (m) et le rapsyn (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rapsn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rapsn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.