Plásmido CRISPR de Activación (h) Rap 2B: sc-403292-ACT

RAP2B codifica Rap2B, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para regular la transducción de señales, el tráfico de membranas y la remodelación del citoesqueleto. Rap2B participa en vías vinculadas a la adhesión mediada por integrinas, la dinámica vesicular y salidas de señalización relacionadas con MAPK que moldean la migración celular y la respuesta de la célula a señales extracelulares. En contextos hematopoyéticos y vasculares, Rap2B se asocia estrechamente con la activación plaquetaria y los procesos de secreción, lo que respalda estudios sobre biología de la trombosis y señalización inflamatoria. Se ha informado de una expresión o actividad desregulada de RAP2B en múltiples escenarios relevantes para enfermedad, incluidos fenotipos de invasión y metástasis asociados al cáncer, lo que la convierte en un nodo útil para el interrogatorio mecanístico de vías.

Rap 2B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAP2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rap 2B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAP2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAP2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rap 2B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAP2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rap 2B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rap 2B en células tumorales con expresión de RAP2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.