Rap 2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403109

Descripción general

RAP2A codifica Rap2A, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que alterna entre estados unidos a GDP y a GTP para regular la transducción de señales aguas abajo de receptores en la superficie celular. Rap2A contribuye a la remodelación del citoesqueleto, al tráfico vesicular y a la adhesión celular al coordinar vías que influyen en la dinámica de la actina y en la organización de la membrana, incluida la comunicación cruzada con la señalización MAPK y las redes de GTPasas de la familia Rho. A través de sus funciones en el control de la polaridad celular, la migración y la proliferación, la actividad alterada de RAP2A se ha vinculado con fenotipos de crecimiento desregulado e invasión observados en múltiples contextos patológicos, incluidos el cáncer y afecciones inflamatorias. Por ello, RAP2A es un nodo útil para desentrañar cómo los circuitos de pequeñas GTPasas ajustan la señalización impulsada por receptores y la plasticidad celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rap 2A (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RAP2A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RAP2A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RAP2A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rap 2A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RAP2A para la investigación de la señalización de Rap 2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RAP2A críticos para la función de Rap 2A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RAP2A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rap 2A CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Rap 2A CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RAP2A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rap 2A (h) y el plásmido HDR Rap 2A (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RAP2A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RAP2A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.