Plásmido CRISPR de Activación (h) Rap 2A: sc-403109-ACT

RAP2A codifica la pequeña GTPasa humana Rap2A, miembro de la superfamilia Ras, que alterna entre los estados unidos a GDP y a GTP para regular la transducción de señales en las membranas celulares. Rap2A participa en vías que controlan la remodelación del citoesqueleto de actina, la adhesión mediada por integrinas, la polaridad celular y el tráfico vesicular, influyendo en procesos como la migración y la extensión de neuritas. A través de interacciones con efectores que se conectan con la señalización MAPK y con redes de GTPasas de la familia Rho, RAP2A ayuda a coordinar el control espacial de señales de proliferación y motilidad. La desregulación de la señalización de Rap2A se ha estudiado en el contexto de la transformación oncogénica, fenotipos invasivos y la biología neurológica y vascular, donde están implicadas alteraciones en la adhesión y la dinámica del citoesqueleto.

Rap 2A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAP2A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rap 2A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAP2A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAP2A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rap 2A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAP2A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rap 2A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rap 2A en células tumorales con expresión de RAP2A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.