Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ran BP-1 (m): sc-422595

Présentation

Ranbp1 code pour la protéine 1 de liaison à Ran (Ran BP‑1), un régulateur conservé du cycle de la GTPase Ran qui coordonne le transport nucléocytoplasmique en modulant la dynamique RanGTP/RanGDP. Par son interaction avec Ran et avec des processus dépendants de RCC1/RanGAP, Ran BP‑1 contribue à l’import/export nucléaire, à l’assemblage du fuseau et à la progression mitotique, reliant le contrôle du transport à la fidélité du cycle cellulaire. Une perturbation de la voie Ran peut compromettre la stabilité du génome et la prolifération, ce qui rend la fonction de Ranbp1 pertinente pour l’étude des défauts du développement et de la transformation oncogénique. Dans les modèles murins, Ran BP‑1 est fréquemment étudiée dans le contexte de la signalisation dépendante du transport nucléaire et des phénotypes de division cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ran BP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ranbp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ranbp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ranbp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ran BP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ranbp1 pour l'étude de la signalisation de Ran BP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ranbp1 essentiels à la fonction de Ran BP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ranbp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ran BP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Ran BP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ranbp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ran BP-1 plasmide HDR (m) et le Ran BP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ranbp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ranbp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.