Plásmido CRISPR de Activación (h) Ral BP-1: sc-402752-ACT

RALBP1 codifica Ral BP-1 (también conocida como RLIP76), un efector multifuncional de las GTPasas Ral que integra la señalización con el tráfico de membranas y la dinámica del citoesqueleto. Ral BP-1 participa en la endocitosis dependiente de clatrina, la internalización de receptores y la remodelación de actina mediante interacciones con adaptadores y vías de pequeñas GTPasas, vinculando la actividad de RalA/RalB con la motilidad y programas celulares de respuesta al estrés. Esta proteína también se ha relacionado con funciones de transporte dependientes de ATP y con respuestas celulares de desintoxicación, favoreciendo la supervivencia bajo estrés oxidativo o xenobiótico. La expresión o señalización desregulada de RALBP1 se asocia con fenotipos de proliferación, invasión y resistencia a terapias en múltiples contextos tumorales, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de señalización oncogénica y adaptación al estrés celular.

Ral BP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RALBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ral BP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RALBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RALBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ral BP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RALBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ral BP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ral BP-1 en células tumorales con expresión de RALBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.