Plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral A (h): sc-403983

Présentation

RALA code RalA, une petite GTPase apparentée à Ras qui alterne entre les états liés au GDP et au GTP afin de coordonner la transduction du signal en aval des entrées de la famille Ras. La forme active de RalA régule le trafic vésiculaire, l’exocytose polarisée, l’endocytose et le remodelage du cytosquelette d’actine via des effecteurs tels que le complexe exocyst et RalBP1, reliant la dynamique membranaire à la migration et à la prolifération cellulaires. La signalisation de RalA s’articule avec des réseaux associés à MAPK et à PI3K et contribue au contrôle de la cytocinèse ainsi qu’à l’homéostasie mitochondriale. Une activité dérégulée de RALA a été impliquée dans des contextes de signalisation oncogénique et des programmes de motilité cellulaire altérés, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie tumorale et des voies associées aux métastases.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Ral A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RALA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RALA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RALA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Ral A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RALA pour l'étude de la signalisation de Ral A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RALA essentiels à la fonction de Ral A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RALA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Ral A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Ral A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RALA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Ral A plasmide HDR (h) et le Ral A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RALA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RALA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.