Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
RADX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409991
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RADX Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RADX, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RADX Antibody (A-3): sc-514563
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RADX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409991 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CXorf57 codifica RADX, un fattore legante il DNA a singolo filamento che modula la dinamica delle forcelle di replicazione e contribuisce a mantenere la stabilità del genoma durante la fase S. RADX antagonizza il caricamento di RAD51 sulle forcelle di replicazione bloccate, modulando la ricombinazione omologa e coordinando le risposte allo stress replicativo. Attraverso queste funzioni, contribuisce a preservare l’integrità delle forcelle di replicazione, a sopprimere la ricombinazione aberrante e a controllare le vie di segnalazione del danno al DNA. La disregolazione dell’equilibrio tra protezione della forcella e riparazione associato a RADX è rilevante per i meccanismi alla base dei fenotipi di instabilità genomica osservati nella biologia dei tumori e in altri modelli di malattia associati allo stress replicativo.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RADX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CXorf57 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CXorf57 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CXorf57 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RADX.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CXorf57 per lo studio della segnalazione di RADX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CXorf57 critici per la funzione di RADX
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CXorf57 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RADX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RADX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CXorf57. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RADX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RADX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CXorf57 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CXorf57 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.