Plásmido CRISPR de Activación (m) Radixin: sc-422634-ACT

El gen Rdx de ratón codifica radixina, una proteína andamiaje de la familia ERM (ezrina–radixina–moesina) que enlaza la F-actina cortical con proteínas transmembrana para organizar la arquitectura de la membrana. La radixina favorece la formación de microvellosidades, la polaridad celular y la estabilidad de las uniones adherentes, y ayuda a coordinar centros de señalización que influyen en la dinámica de las GTPasas Rho y en la remodelación del citoesqueleto. A través de estas funciones, la radixina contribuye a la migración celular regulada y a las propiedades de la barrera epitelial, procesos que se investigan con frecuencia en biología del desarrollo y en estudios de homeostasis tisular. Las alteraciones en el acoplamiento membrana–citoesqueleto dependiente de ERM y en la regulación de las uniones se examinan a menudo en modelos de invasión, inflamación y progresión metastásica, lo que convierte a Rdx en un nodo relevante para la investigación mecanística.

Radixin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rdx sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Radixin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rdx en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rdx, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Radixin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rdx y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Radixin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Radixin en células tumorales con expresión de Rdx silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.