Radical Fringe CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422659

Übersicht

Rfng kodiert Radical Fringe, eine im Golgi-Apparat lokalisierte β1,3‑N‑Acetylglucosaminyltransferase, die O‑Fucose‑Reste an EGF‑ähnlichen Wiederholungen von Notch‑Rezeptoren modifiziert und dadurch die ligandenabhängige Stärke der Notch‑Signalübertragung feinabstimmt. Durch eine kontextabhängige Verstärkung von Interaktionen mit Delta‑like gegenüber Jagged/Serrate trägt Radical Fringe zur Regulation von Zellschicksalsentscheidungen, Grenzbildung und Gewebemusterung während der Entwicklung sowie in adulten Stamm‑/Vorläuferzellkompartimenten bei. Veränderte, Fringe‑vermittelte Glykosylierung kann den Output des Notch‑Signalwegs und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme verschieben, die Proliferation und Differenzierung steuern. Eine Fehlregulation der Notch‑Signalgebung ist an vielfältigen krankheitsrelevanten Prozessen beteiligt, wodurch Rfng einen nützlichen Ansatzpunkt darstellt, um Notch‑getriebene Phänotypen in zellulären und in vivo‑Mausmodellen zu untersuchen.

Das Radical Fringe CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Rfng-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Rfng-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Rfng nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Radical Fringe-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Rfng-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Radical Fringe-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Rfng-Exone abzielen, die für die Radical Fringe-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Rfng-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Radical Fringe CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Radical Fringe CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Rfng-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Radical Fringe HDR-Plasmid (m) und Radical Fringe HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Rfng-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Rfng-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.