RAD51AP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-408187-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RAD51AP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RAD51AP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und RAD51AP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAD51AP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RAD51AP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RAD51AP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAD51AP1 (RAD51-assoziiertes Protein 1) ist ein DNA-Reparaturfaktor, der mit RAD51 interagiert und die homologe Rekombination bei replikationsassoziierten Schäden und der Reparatur von Doppelstrangbrüchen fördert. Es unterstützt die RAD51-vermittelte Stranginvasion und die Bildung von D-Loops und trägt damit zur Stabilisierung und zum Wiederanlaufen gestoppter Replikationsgabeln sowie zur Aufrechterhaltung der Genomintegrität bei. Die Aktivität von RAD51AP1 ist mit zentralen Prozessen der DNA-Schadensantwort verknüpft, darunter die Signalgebung des S-Phasen-Checkpoints und die Bewältigung von Replikationsstress. Eine veränderte Expression oder Funktion von RAD51AP1 wurde mit Phänotypen genomischer Instabilität in mehreren Krebsarten in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu DNA-Reparaturabhängigkeiten von Tumorzellen macht.
RAD51AP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAD51AP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAD51AP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAD51AP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAD51AP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.