Partículas Lentivirales de Activación (h) Rad21: sc-402348-LAC

El RAD21 humano codifica Rad21, una subunidad kleisina central del complejo cohesina que mantiene unidas a las cromátidas hermanas y organiza la arquitectura de la cromatina de orden superior. Rad21 es necesaria para la segregación cromosómica precisa, la reparación de roturas de doble cadena del ADN y la regulación de la expresión génica mediante la comunicación entre potenciadores y promotores y los límites de los dominios de asociación topológica (TAD). A través de la coordinación de la cohesina con CTCF y con factores de replicación y reparación, RAD21 influye en la progresión del ciclo celular y en las vías de estabilidad del genoma. La alteración de la dosis de RAD21 o de la función de la cohesina se ha vinculado a cohesinopatías y, en investigación sobre biología del cáncer, se ha asociado con programas transcripcionales alterados e inestabilidad cromosómica.

Las partículas de activación lentiviral Rad21 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAD21 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rad21 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAD21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rad21. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAD21 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.