Partículas Lentivirales de Activación (h) Rac 1: sc-400175-LAC

RAC1 codifica la pequeña GTPasa Rac1, un interruptor molecular de la familia Rho que coordina la remodelación del citoesqueleto de actina, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling) y la polaridad celular al alternar entre los estados unidos a GDP y a GTP. A través de efectores aguas abajo como las PAK y el complejo WAVE/Arp2/3, Rac1 regula la dinámica de adhesión, el tráfico vesicular y la migración celular dirigida, y se conecta con la señalización de PI3K y la producción de ROS dependiente de la NADPH oxidasa. La actividad de RAC1 influye en la proliferación, la supervivencia y programas transcripcionales, integrando señales de receptores de factores de crecimiento e integrinas. La desregulación de la señalización de RAC1 se ha implicado en múltiples procesos relevantes para la enfermedad, incluidos fenotipos invasivos, alteraciones en la motilidad de células inmunitarias y señalización inflamatoria aberrante, por lo que es un objetivo frecuente en estudios mecanísticos de biología celular y de rutas de señalización.

Las partículas de activación lentiviral Rac 1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAC1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rac 1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rac 1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAC1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.