Rac 1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400175-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rac 1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rac 1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Rac 1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rac 1/2/3: sc-514583
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rac 1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400175-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rac 1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400175-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAC1 kodiert Rac1, eine kleine GTPase der Rho-Familie, die zwischen einem aktiven, GTP-gebundenen und einem inaktiven, GDP-gebundenen Zustand wechselt, um den Umbau des Aktinzytoskeletts, Membranruffling und die Zellpolarität zu koordinieren. Rac1 signalisiert über Effektorproteine wie PAK-Kinasen, den WAVE-Regulationskomplex und die NADPH-Oxidase und integriert Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen und Integrinen, um Migration, Adhäsion, Endozytose und die Bildung reaktiver Sauerstoffspezies zu regulieren. In der Humanbiologie wird eine fehlregulierte RAC1-Aktivität mit veränderten epithelial-mesenchymalen Dynamiken, Invasionsprogrammen und der Migration von Immunzellen in Verbindung gebracht und wurde mit Krebsprogression, neuroentwicklungsbedingten Störungen und entzündlichen Phänotypen assoziiert. Diese Verknüpfungen in Signalwegen machen RAC1 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt, um in mechanistischen Studien die Kontrolle des Zytoskeletts, das Crosstalk mit MAPK-Signalwegen und Zellzustandsübergänge zu untersuchen.
Rac 1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.