Plásmido CRISPR de Activación (h) Rac 1: sc-400175-ACT

RAC1 codifica la pequeña GTPasa de la familia Rho, Rac1, un regulador central de la dinámica del citoesqueleto de actina que controla la formación de lamelipodios, la polaridad celular, la renovación de las adhesiones y la migración dirigida. Rac1 señaliza a través de efectores como las quinasas PAK y el complejo WAVE/Arp2/3, integrando señales de receptores tirosina quinasas e integrinas para modular la señalización MAPK, la generación de especies reactivas de oxígeno y el tráfico endocítico. A través de estas vías, RAC1 influye en la proliferación, la supervivencia y la función de barrera en numerosos tipos celulares. La actividad desregulada de RAC1 se estudia con frecuencia en el contexto de la señalización oncogénica, la motilidad celular asociada a la metástasis, las respuestas inflamatorias y fenotipos del neurodesarrollo en los que se alteran la remodelación del citoesqueleto y la plasticidad sináptica.

Rac 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rac 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rac 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rac 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rac 1 en células tumorales con expresión de RAC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.