RABAPTIN-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403303

Descripción general

RABEP1 codifica RABAPTIN-5, un efector de Rab5 que coordina el tráfico endocítico temprano al promover eventos de anclaje y fusión de vesículas en endosomas tempranos. Mediante interacciones con GTPasas de la familia Rab5 y con la maquinaria de clasificación endosomal, RABAPTIN-5 ayuda a regular la internalización de receptores, la decisión entre reciclaje o degradación de la carga y la maduración del endosoma. Estos procesos influyen en la salida de señalización de los receptores de superficie y en el recambio de proteínas de membrana, vinculando la función de RABEP1 con vías que controlan la señalización de factores de crecimiento, la captación de nutrientes y la homeostasis de membrana. La desregulación del control endocítico y del tráfico dependiente de Rab5 se ha asociado con dinámicas de señalización alteradas y con fenotipos celulares observados en biología del cáncer y en modelos relevantes para la neurodegeneración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RABAPTIN-5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RABEP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RABEP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RABEP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RABAPTIN-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RABEP1 para la investigación de la señalización de RABAPTIN-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RABEP1 críticos para la función de RABAPTIN-5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RABEP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RABEP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RABAPTIN-5 (h) y el plásmido HDR RABAPTIN-5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RABEP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RABEP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.