Plasmide Double Nickase (h) Rab11-FIP1: sc-407521-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rab11-FIP1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rab11-FIP1 Double Nickase (h) et le plasmide Rab11-FIP1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RAB11FIP1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rab11-FIP1 Antibody (3A12H9D2): sc-517228
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rab11-FIP1 | sc-407521-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rab11-FIP1 | sc-407521-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB11FIP1 code Rab11-FIP1, un effecteur de la famille Rab11 qui coordonne le trafic des endosomes de recyclage dépendant de Rab11 et le recyclage membranaire vers la membrane plasmique. Grâce à ses interactions avec de petites GTPases et des protéines motrices/adaptatrices, Rab11-FIP1 contribue à réguler le recyclage des récepteurs, le transport polarisé, la cytocinèse et le maintien de l’architecture des cellules épithéliales. Ces processus influencent les sorties de signalisation et la motilité cellulaire en contrôlant la localisation et le renouvellement des protéines membranaires, notamment des récepteurs et des molécules d’adhérence. Un recyclage endosomal dérégulé et des programmes de trafic associés à Rab11-FIP1 ont été liés à des modifications du comportement prolifératif et migratoire en biologie du cancer, ainsi qu’à des défauts plus larges des voies de transport vésiculaire pertinents pour la neurobiologie et la régulation métabolique.
Rab11-FIP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RAB11FIP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RAB11FIP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RAB11FIP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RAB11FIP1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.