Plásmido Doble Nickase (h) Rab 5A: sc-417949-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Rab 5A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rab 5A (h) y el plásmido de doble nickasa Rab 5A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RAB5A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rab 5A Anticuerpo (C-3): sc-515401
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Rab 5A | sc-417949-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAB5A codifica Rab 5A, una pequeña GTPasa que actúa como regulador maestro de la endocitosis temprana y del tráfico de membranas endosomales. En su estado unido a GTP, Rab 5A coordina la internalización mediada por clatrina, la fusión de endosomas tempranos y la clasificación de la carga al reclutar efectores que controlan el anclaje de vesículas y la señalización de fosfoinosítidos. A través de estas funciones, influye en el recambio de receptores y en la dinámica de la transducción de señales en vías como el tráfico de receptores de factores de crecimiento y la maduración endosomal. La actividad o expresión desregulada de RAB5A se ha vinculado con programas de transporte intracelular alterados observados en la invasión de células cancerosas, fenotipos neurodegenerativos y mecanismos de entrada de patógenos, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos del tráfico de membranas y la señalización.
Rab 5A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAB5A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAB5A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAB5A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAB5A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.