Partículas Lentivirales de Activación (h) Rab 4A: sc-401828-LAC

RAB4A codifica Rab 4A, una pequeña GTPasa que regula la dinámica de los endosomas tempranos y el reciclaje rápido de proteínas de membrana internalizadas de vuelta a la membrana plasmática. Al coordinar la gemación, motilidad y fusión de vesículas mediante interacciones con proteínas efectoras, Rab 4A influye en el tráfico de receptores, la captación de nutrientes y la atenuación de señales en vías como el reciclaje de receptores de factores de crecimiento y el recambio de integrinas. La alteración de la actividad de RAB4A se ha asociado con una clasificación endocítica desregulada, cambios en la migración celular y la remodelación de las salidas de señalización en el cáncer y en otros contextos proliferativos o neurodegenerativos. Como resultado, RAB4A se estudia con frecuencia para dilucidar cómo el transporte endosomal controla la disponibilidad de receptores en la superficie celular, la señalización de quinasas aguas abajo y la identidad de los compartimentos de membrana.

Las partículas de activación lentiviral Rab 4A (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAB4A en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rab 4A (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAB4A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rab 4A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAB4A y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.