Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 4A: sc-401828-ACT

RAB4A codifica la pequeña GTPasa Rab4A, un regulador clave de la dinámica de los endosomas tempranos y del reciclaje rápido del cargamento internalizado de vuelta a la membrana plasmática. Rab4A coordina la gemación, la motilidad y el anclaje de vesículas mediante interacciones con efectores endosómicos, influyendo en el tráfico de receptores y transportadores que modulan la transducción de señales y la composición de la membrana. A través del control del reciclaje endocítico, RAB4A repercute en procesos como el recambio de receptores de factores de crecimiento, la captación de nutrientes y la remodelación del citoesqueleto. El tráfico dependiente de Rab4A desregulado se ha investigado en el contexto de la señalización oncogénica, la regulación metabólica y fenotipos neurodegenerativos, donde la alteración de la función endosomal perturba la homeostasis celular.

Rab 4A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB4A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 4A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB4A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB4A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 4A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB4A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 4A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 4A en células tumorales con expresión de RAB4A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.