Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 44: sc-418677-ACT

RAB44 codifica Rab 44, una pequeña GTPasa de la familia Rab de gran tamaño implicada en el tráfico vesicular y la dinámica de membranas, que coordinan el transporte intracelular, la organización endolisosomal y la secreción regulada. Como interruptor molecular que alterna entre los estados unidos a GTP y a GDP, se espera que Rab 44 interactúe con la maquinaria de anclaje y fusión dependiente de Rab que modela la maduración de los compartimentos y las salidas de señalización. Se han descrito patrones de expresión alterados de RAB44 en contextos relacionados con el sistema inmunitario y en transcriptomas de cáncer, lo que respalda su uso como marcador y como nodo funcional para estudiar programas de tráfico desregulados en estados celulares asociados a enfermedad. Investigar la actividad de Rab 44 puede ayudar a definir cómo el transporte vesicular influye en el reciclaje de receptores, la señalización inflamatoria y las respuestas celulares al estrés.

Rab 44 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB44 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 44 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB44 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB44, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 44. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB44 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 44 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 44 en células tumorales con expresión de RAB44 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.