Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 38: sc-404742-ACT

RAB38 codifica Rab 38, una pequeña GTPasa de la familia Rab que regula el tráfico vesicular y la biogénesis de orgánulos, con funciones destacadas en el transporte de endosomas a lisosomas y en la maduración de orgánulos relacionados con lisosomas. Rab 38 coordina la clasificación de carga y la dinámica de membranas mediante interacciones con complejos de anclaje y efectores, influyendo en la entrega de proteínas a los melanosomas y a otros compartimentos secretores especializados. La alteración del tráfico dependiente de RAB38 puede modificar la formación de gránulos de pigmento, la función lisosomal y los fenotipos de secreción, vinculando esta vía con la homeostasis celular en células pigmentarias y con programas secretores relacionados con el sistema inmunitario. Como nodo en redes de transporte intracelular, Rab 38 es relevante para estudios mecanísticos de defectos en el tráfico de membranas observados en diversos estados celulares asociados a enfermedades.

Rab 38 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB38 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 38 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB38 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB38, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 38. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB38 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 38 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 38 en células tumorales con expresión de RAB38 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.