Rab 34 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406606

Panoramica

RAB34 codifica Rab 34, una piccola GTPasi della famiglia Rab che regola il traffico intracellulare di membrane, con ruoli descritti nella dinamica del Golgi e degli endosomi, nel posizionamento dei lisosomi e nella maturazione dei fagosomi. Alternando gli stati legati a GTP e a GDP, Rab 34 contribuisce a coordinare il trasporto vescicolare, l’ancoraggio degli organelli e lo smistamento dei carichi, influenzando il turnover dei recettori e gli output di segnalazione. La deregolazione del traffico mediato dalle Rab può alterare la funzione dell’asse autofagia–lisosoma e l’omeostasi delle membrane, processi spesso studiati nel comportamento delle cellule tumorali, nella neurodegenerazione e nelle interazioni ospite–patogeno. RAB34 rappresenta quindi un nodo utile per analizzare le vie di trasporto vescicolare e il loro impatto sulla fisiologia cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 34 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RAB34 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RAB34 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RAB34 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 34.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RAB34 per lo studio della segnalazione di Rab 34, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RAB34 critici per la funzione di Rab 34
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RAB34 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab 34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rab 34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RAB34. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 34 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rab 34 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RAB34 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RAB34 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.