Rab 34 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406606

Übersicht

RAB34 kodiert Rab34, eine kleine GTPase der Rab-Familie, die den intrazellulären Membrantransport reguliert. Beschrieben sind Funktionen u. a. in der Golgi- und Endosomendynamik, der Positionierung von Lysosomen sowie der Reifung von Phagosomen. Durch den Wechsel zwischen GTP- und GDP-gebundenen Zuständen koordiniert Rab34 den Vesikeltransport, das Andocken/Verankern von Organellen und die Sortierung von Fracht, was den Rezeptorumsatz und die Signalweiterleitung beeinflusst. Eine Fehlregulation des Rab-vermittelten Traffickings kann die Autophagie–Lysosomen-Funktion und die Membranhomöostase stören – Prozesse, die häufig in Studien zum Verhalten von Krebszellen, zu Neurodegeneration und zu Wirt–Pathogen-Interaktionen untersucht werden. RAB34 ist daher ein nützlicher Ansatzpunkt, um vesikuläre Transportwege und deren Einfluss auf die Zellphysiologie zu untersuchen.

Das Rab 34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RAB34-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RAB34-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RAB34 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rab 34-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RAB34-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rab 34-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RAB34-Exone abzielen, die für die Rab 34-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RAB34-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rab 34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rab 34 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RAB34-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rab 34 HDR-Plasmid (h) und Rab 34 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RAB34-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RAB34-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.