Plásmido Doble Nickase (m2) Rab 27b: sc-429802-NIC-2
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m2)Rab 27b consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Rab 27b (m2) y el plásmido de doble nickasa Rab 27b (m22) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Rab27b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Rab 27b Anticuerpo (1596CT245.254.49): sc-517602
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m2) Rab 27b | sc-429802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino Rab27b codifica la pequeña GTPasa Rab27b, miembro de la superfamilia Ras que regula el tráfico vesicular al controlar el acoplamiento y la exocitosis de gránulos secretores y orgánulos relacionados con endosomas mediante interacciones con efectores como las proteínas de la familia Slp/Slac2 y motores de miosina. La actividad de Rab27b contribuye a la secreción regulada, a la dinámica de los orgánulos relacionados con lisosomas y a la coordinación del citoesqueleto, respaldando procesos como la liberación de gránulos densos plaquetarios, la degranulación de neutrófilos y la función secretora epitelial. La desregulación del tráfico dependiente de Rab27b se ha asociado con respuestas inflamatorias alteradas y con un comportamiento metastásico en modelos de cáncer, lo que convierte a esta diana en una herramienta útil para estudiar la remodelación del microambiente impulsada por la secreción. Los reactivos de Rab27b se aplican en investigación mecanística con células primarias de ratón y modelos in vivo para analizar la biogénesis de gránulos, la regulación de exosomas y del secretoma, y los fenotipos de transporte vesicular en biología inmunitaria y tumoral.
Rab 27b El plásmido de doble nicasa (m2) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rab27b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rab27b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rab27b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rab27b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.