Plásmido Doble Nickase (h) Rab 27b: sc-403498-NIC

RAB27B codifica la pequeña GTPasa Rab27b, un regulador clave del tráfico vesicular que coordina el acoplamiento y la fusión de gránulos secretores y exosomas en la membrana plasmática. Rab27b funciona alternando entre estados unidos a GDP y a GTP, e interactúa con redes de efectores implicadas en la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de membranas y la exocitosis regulada. En células humanas, el tráfico dependiente de RAB27B influye en programas de secreción relevantes para la señalización inmunitaria e inflamatoria, la liberación de gránulos plaquetarios y de neutrófilos, y la comunicación tumor–estroma mediante vesículas extracelulares. La expresión o actividad desregulada de RAB27B se ha asociado con fenotipos alterados de secreción vesicular observados en la progresión del cáncer y el comportamiento metastásico, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en la investigación del transporte de membranas.

Rab 27b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAB27B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAB27B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAB27B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAB27B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.