Plásmido Doble Nickase (h) Rab 27a: sc-401116-NIC

RAB27A codifica la pequeña GTPasa Rab27a, un regulador clave del tráfico vesicular que controla el acoplamiento y la fusión de los gránulos secretorios con la membrana plasmática mediante efectores como la melanofilina y la maquinaria del exocisto. En las células inmunitarias, Rab27a coordina la exocitosis de gránulos líticos y la función citotóxica, mientras que en los melanocitos favorece el transporte de melanosomas y la pigmentación. Estos procesos se entrecruzan con la dinámica del citoesqueleto, la fusión de membranas dependiente de SNARE y las vías de secreción regulada. La actividad desregulada de RAB27A se ha vinculado a trastornos de la función inmunitaria y de la pigmentación, y se estudia con frecuencia en el contexto de la invasión y la metástasis de células tumorales a través de la liberación de vesículas extracelulares y de programas de tráfico de membranas.

Rab 27a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAB27A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAB27A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAB27A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAB27A alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.