Partículas Lentivirales de Activación (h) Rab 26: sc-411810-LAC

RAB26 codifica Rab 26, un miembro de la familia de pequeñas GTPasas Rab que regula el tráfico intracelular de membranas alternando entre estados unidos a GDP y a GTP, y coordinando la gemación, motilidad y fusión de vesículas. Rab 26 se ha implicado en la organización de la vía endolisosomal y secretora, incluidos pasos de tráfico vinculados a procesos relacionados con la autofagia y a la exocitosis regulada en tipos celulares especializados. Al influir en la clasificación de la carga y en la identidad de los compartimentos, RAB26 puede modular la proteostasis y las salidas de señalización que dependen de la dinámica vesicular. El tráfico desregulado dependiente de GTPasas Rab es ampliamente relevante para la neurobiología y las vías de respuesta al estrés, lo que motiva estudios mecanísticos de la función de RAB26 en la homeostasis celular.

Las partículas de activación lentiviral Rab 26 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAB26 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rab 26 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAB26, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rab 26. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAB26 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.