Partículas Lentivirales de Activación (h) Rab 20: sc-412563-LAC

RAB20 codifica Rab20, una pequeña GTPasa relacionada con Ras que regula el tráfico de membranas, la clasificación endocítica y la dinámica de los orgánulos al alternar entre estados unidos a GDP y a GTP. Rab20 se ha relacionado con la maduración de endosomas y con procesos asociados a fagosomas/lisosomas que influyen en el recambio de receptores, el transporte vesicular y las respuestas celulares al estrés y a la disponibilidad de nutrientes. Su actividad se cruza con vías que controlan el intercambio vesicular y la adaptación metabólica, lo que la hace relevante para estudios de inflamación, biología de infecciones y metabolismo celular desregulado. Se ha descrito una expresión alterada de RAB20 en múltiples programas de expresión asociados a enfermedades, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en investigaciones centradas en vías.

Las partículas de activación lentiviral Rab 20 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAB20 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rab 20 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAB20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rab 20. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAB20 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.