Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 20: sc-412563-ACT

RAB20 codifica Rab20, una pequeña GTPasa que regula el tráfico vesicular dentro del sistema endocítico, coordinando eventos de transporte de membranas que influyen en el reciclaje de receptores, la maduración de endosomas y la señalización compartimentalizada. Al alternar entre los estados unidos a GTP y a GDP, Rab20 ayuda a organizar la gemación, la motilidad y la fusión de vesículas mediante interacciones con efectores que acoplan el tráfico a la dinámica del citoesqueleto y a la función de los orgánulos. La actividad alterada de la red de GTPasas Rab, incluida la desregulación de RAB20, se ha asociado con perturbaciones de la homeostasis celular, como la adaptación metabólica, la señalización inflamatoria y fenotipos oncogénicos en múltiples contextos experimentales. Como resultado, RAB20 se estudia con frecuencia en vías que vinculan el transporte intracelular con respuestas al estrés y estados celulares relevantes para la enfermedad.

Rab 20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 20 en células tumorales con expresión de RAB20 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.