Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 1B: sc-402021-ACT

RAB1B codifica la pequeña GTPasa Rab1B, un regulador central del tráfico vesicular del retículo endoplásmico (RE) al aparato de Golgi y dentro del propio Golgi, que coordina la clasificación de la carga, el anclaje de membranas y la fusión dependiente de SNARE. Al alternar entre estados unidos a GDP y a GTP, Rab1B controla la dinámica temprana de la vía secretora, lo que influye en la homeostasis de los orgánulos, el procesamiento de glicoproteínas y la proteostasis secretora. La señalización de la familia Rab1 se integra con la autofagia y con programas de tráfico sensibles al estrés, vinculando el transporte de membranas con la detección de nutrientes y el control de calidad. La desregulación del tráfico mediado por Rab1 se ha asociado con fenotipos celulares relevantes para la neurodegeneración, la biología de infecciones y la señalización oncogénica, a través de cambios en la secreción y en las respuestas de estrés de los orgánulos.

Rab 1B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 1B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 1B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 1B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 1B en células tumorales con expresión de RAB1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.