Plásmido Doble Nickase (m) Rab 14: sc-427035-NIC

El gen Rab14 de ratón codifica la pequeña GTPasa Rab14, un miembro de la superfamilia RAS que coordina el tráfico intracelular de membranas al alternar entre estados unidos a GDP y a GTP. Rab14 regula el reciclaje endocítico y el transporte biosintético entre el Golgi, los endosomas y la membrana plasmática, influyendo en la clasificación de la carga, el recambio de receptores y la maduración de vesículas mediante interacciones con efectores y con la maquinaria SNARE. Estos procesos se entrecruzan con la señalización, la captación de nutrientes y la organización del citoesqueleto, lo que convierte a Rab14 en un nodo útil para estudiar alteraciones en la dinámica de membranas. En la literatura, la desregulación del tráfico dependiente de Rab14 se ha vinculado con cambios en la migración celular y en la homeostasis metabólica, y se investiga con frecuencia en modelos de trastornos proliferativos y neurobiológicos donde el transporte vesicular contribuye al fenotipo.

Rab 14 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Rab14 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Rab14. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Rab14. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Rab14 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.